Hoechst farvelægning



Den information, vi har kunnet samle om Hoechst farvelægning, er blevet omhyggeligt gennemgået og struktureret for at gøre den så nyttig som muligt. Du er sandsynligvis kommet her for at finde ud af mere om Hoechst farvelægning. På internettet er det let at fare vild i et virvar af sider, der taler om Hoechst farvelægning, men som ikke giver dig det, du gerne vil vide om Hoechst farvelægning. Vi håber, at du vil fortælle os i kommentarerne, om du kan lide det, du har læst om Hoechst farvelægning nedenfor. Hvis de oplysninger om Hoechst farvelægning, som vi giver dig, ikke er hvad du søgte, så lad os det vide, så vi kan forbedre denne hjemmeside dagligt.

.

De Hoechst farvestoffer er en del af familien af farvestoffer under anvendelse af markører, fluorescerende anvendes til at markere den DNA . Disse forbindelser fra  bisbenzimidfamilien blev oprindeligt udviklet af Hoechst AG, som nummererede dens kreationer. Således er  Hoechst 33342 forbindelsen nr .  33342 udviklet af dette firma. Der er tre lignende DNA- farvningsforbindelser : Hoechst 33258 , Hoechst 33342 og Hoechst 34580 . Hoechst 33258 og Hoechst 33342 farvestoffer er de mest almindelige og har lignende excitations- / emissionsspektre . Den Hoechst 33342 har en celle permeabilitet ti gange større end H33258.

Molekylære egenskaber

Begge forbindelser exciteres med ultraviolette stråler til en bølgelængde omkring 350  nm , de udsender begge et cyanblåt lys ved fluorescens . Den maksimale emissionsbølgelængde er ved 461  nm . Når det ikke er bundet, fluorescerer farvestoffet det maksimale mellem 510 og 540  nm . Hoechst-farvningen kan ophidses af en xenonlampe eller en kviksølvdamplampe eller af en UV- laser . The Stokes skift mellem excitations- og emissionsmaksima gør Hoechst farvning meget nyttig i eksperimenter, hvor et stort antal fluoroforer anvendes. Fluorescensintensiteten af Hoechst pletten stiger med pH af opløsningsmidlet .

Hoechst-farvestoffer er opløselige i vand og i organiske opløsningsmidler, såsom dimethylformamid eller dimethylsulfoxid . Opløsninger kan opnås op til en koncentration på 10  mg / ml . De vandige opløsninger er stabile, mere end seks måneder, hvis de opbevares mellem 2 og ° C og beskyttes mod lys. Ved længere samtaler opløsningerne fryses ved en temperatur under -20  ° C .

Farvestoffet binder sig til den mindre rille i det dobbeltstrengede DNA med mere affinitet for sekvenser rige på adenin og thymin . Binding til disse AT-rige sekvenser øger den opnåede fluorescens betydeligt. Hoechst-farvning er gennemtrængelig for celler: det gør det muligt at markere faste levende celler.

Anvendelser

Transmissionsbillede af HeLa- celler , overlagt med Hoechst 33258 (blå) mærkning. Den venstre celle er i prometaphase , et stadium af mitose  ; dens kromosomer udsender meget lys ved fluorescens, fordi DNA er meget kompakt (heterochromatin).

En koncentration på mellem 0,1 og 12  μg / ml anvendes generelt til farvning af eukaryote eller prokaryote celler . Mærkning tager fra et til tredive minutter ved stuetemperatur eller 37  ° C , derefter skylles cellerne. Grøn fluorescens svarende til ubundet farvestof kan observeres, hvis der blev brugt for meget forbindelse, eller hvis prøven ikke blev skyllet ordentligt. Hoechst-pletten bruges ofte som et alternativ til et andet nukleinsyrefarvestof  : DAPI .

Vigtigste forskelle mellem Hoechst og DAPI farvestoffer:

  • Hoechst farvestoffer er mindre giftige end DAPI;
  • Hoechst-farvestoffer har en ethylgruppe , der tillader dem at krydse cellemembraner mere frit  ;

Farvestoffer Hoechst 33342 og 33258 er slukket ("quenchet" af fransk engelsk laboratorium, [kwenche] i fonetisk ) af bromodeoxyuridin (BrdU), som bruges til at detektere delende celler. Sidstnævnte integrerer BrdU i det nyligt syntetiserede DNA i stedet for thymidin . Når BrdU inkorporeres i DNA, antages det, at bromiddelen fordrejer den mindre rille i dobbelthelixen og forhindrer Hoechst-farvestoffet i at nå sit optimale bindingssted. Hoechst farvestof kan bruges sammen med BrdU til at spore cellecyklusprogression .

Hoechst-farvestoffer bruges ofte til at plette genomisk DNA i følgende tilfælde:

Toksicitet og sikkerhed

På grund af deres tilknytning til DNA interfererer disse farvestoffer med DNA-replikation under celledeling . Derfor er de potentielt  mutagene og kræftfremkaldende , så der skal overholdes et vist antal regler, når de håndteres og behandles som affald. Hoechst-pletten bruges til at sortere sæd i tilfælde af menneskelige bestande. Dets sikkerhed er blevet drøftet.

Referencer

  1. Hoechst Stains  " , Invitrogren (Molecular Probes)
  2. 264D
  3. J Portugal og Waring, MJ, “  Tildeling af DNA-bindingssteder for 4 ', 6-diamidin-2-phenylindol og bisbenzimid (Hoechst 33258). En komparativ undersøgelse af fodaftryk  ”, Biochimica et Biophysica Acta , bind.  949, nr .  2, s.  158–68 ( PMID  2449244 , DOI  10.1016 / 0167-4781 (88) 90079-6 )
  4. (i) BD Bioscience , Teknikker til Immune Function Analysis , Becton, Dickinson and Company,, 2 nd  ed. ( læs online )
  5. M Kubbies og Rabinovitch, PS, "  Flowcytometrisk analyse af faktorer, der påvirker BrdUrd-Hoechst-slukningseffekten i dyrkede humane fibroblaster og lymfocytter  ", Cytometry , bind.  3, nr .  4,, s.  276–81 ( PMID  6185287 , DOI  10.1002 / cyto.990030408 )
  6. SY Breusegem , Clegg, RM et Loontiens, FG, "  Basesekvensspecificitet for Hoechst 33258 og DAPI-binding til fem (A / T) 4 DNA-steder med kinetisk bevis for mere end et Hoechst 33258-AATT-kompleks med høj affinitet  ", Journal of Molecular Biology , bind.  315, nr .  5,, s.  1049–61 ( PMID  11827475 , DOI  10.1006 / jmbi.2001.5301 )
  7. (i) Molecular Probes Handbook: A Guide til Fluorescent Probes og mærkning Technologies , Iain Johnson, Michelle Spence TZ,, 11 th  ed. , 1060  s. ( ISBN  978-0-9829279-1-5 og 0-9829279-1-6 )
  8. M Kubbies , "  Flowcytometrisk genkendelse af clastogen-induceret kromatinskade i G0 / G1-lymfocytter ved ikke-støkiometrisk Hoechst fluorochrom-binding  ", Cytometry , bind.  11, nr .  3,, s.  386–94 ( PMID  1692786 , DOI  10.1002 / cyto.990110309 )
  9. R Mocharla , Mocharla, H og Hodes, ME, "  En hidtil ukendt, følsom fluorometrisk farvningsteknik til påvisning af DNA i RNA-præparater  ", Nucleic Acids Research , bind.  15, nr .  24,, s.  10589 ( PMID  2447564 , PMCID  339970 , DOI  10.1093 / nar / 15.24.10589 )
  10. W Sterzel , Bedford, P og Eisenbrand, G, “  Automatiseret bestemmelse af DNA ved hjælp af fluorokrom Hoechst 33258  ”, Analytical Biochemistry , vol.  147, nr .  2, s.  462–7 ( PMID  2409841 , DOI  10.1016 / 0003-2697 (85) 90299-4 )
  11. MJ Ashwood-Smith , "  Sikkerhed ved valg af sædceller ved flowcytometri  ", Oxford University Press , bind.  9, nr .  5,, s.  757–759 ( PMID  7929716 , læs online )
  12. I Parrilla , JM Vázquez , C Cuello , MA Gil , J Roca , D Di Berardino og EA Martínez , “  Hoechst 33342 plette- og UV-lasereksponering inducerer ikke genotoksiske effekter i flow-sorteret vildsædsspermatozoer  ”, Reproduktion , vol.  128, nr .  5,, s.  615–621 ( PMID  15509707 , DOI  10.1530 / rep.1.00288 , læs online )

eksterne links

Vi håber, at de oplysninger, vi har indsamlet om Hoechst farvelægning, har været nyttige for dig. Hvis det er tilfældet, så glem ikke at anbefale os til dine venner og familie, og husk, at du altid kan kontakte os, hvis du har brug for os. Hvis du på trods af vores bestræbelser mener, at det, vi har leveret om _title, ikke er helt korrekt, eller at vi bør tilføje eller rette noget, vil vi være taknemmelige, hvis du vil give os besked. At give den bedste og mest omfattende information om Hoechst farvelægning og ethvert andet emne er essensen af denne hjemmeside; vi er drevet af den samme ånd, som inspirerede skaberne af Encyclopedia Project, og derfor håber vi, at det, du har fundet om Hoechst farvelægning på denne hjemmeside, har hjulpet dig med at udvide din viden.

Opiniones de nuestros usuarios

Tina Hjorth

Det er længe siden, at jeg har set en artikel om Hoechst farvelægning skrevet på en så didaktisk måde. Jeg kan godt lide det

Erling Kristensen

Jeg ved ikke, hvordan jeg kom til denne artikel om Hoechst farvelægning, men jeg kunne virkelig godt lide den., Det var artiklen om Hoechst farvelægning, jeg ledte efter