Den dobbelte hybridteknik er en molekylærbiologisk teknik til påvisning af en fysisk interaktion mellem to proteiner .
Teknikken er som følger: der anvendes et testprotein (såsom Gal4 ), hvoraf den ene ende kan knyttes til en aktiverende sekvens, og den anden aktiverer transkriptionen af reportergenet (såsom lacZ ) placeret under kontrol af denne sekvens . Ved genteknologi syntetiseres derefter to hybridproteiner: den ene består af den ene ende af testproteinet fusioneret med det første protein af interesse, den anden dannet af den anden ende fusioneret til det andet protein af interesse. Hvis de to proteiner interagerer fysisk, vil disse to hybrider komme sammen og tillade transkription af reportergenet.
Denne teknik kan dog mislykkes på grund af manipulationerne på proteinerne og kræver adskillige kontroller. Derudover testes gensidigheden systematisk, dvs. fusionerne af de to proteiner af interesse med de to ender af testproteinet vendes. Vi kontrollerer derefter, at vi får det samme resultat.