Det immunhistokemiske stof ( IHC ) er en metode til lokalisering af proteiner i cellerne i et vævsafsnit til påvisning af antigener ved hjælp af antistoffer .
Immunhistokemi udnytter det faktum, at et antistof specifikt binder til antigener i biologisk væv. Antistofferne kan være af polyklonal eller monoklonal oprindelse , idet de monoklonale antistoffer er mere specifikke i det væsentlige.
Immunhistokemi tager sit navn fra roden "immuno" med henvisning til det antistof, der er anvendt i proceduren, fra ordet " kemi " og fra ordet " histologi ", der henviser til undersøgelsen af biologiske væv (sammenlign med immuncytokemi). ).
Et antistof-antigen-par kan visualiseres på flere måder. I de fleste tilfælde er antistoffet konjugeret til et enzym (f.eks. Peroxidase ), som kan katalysere en farveproduktionsreaktion ( f.eks. Immunoperoxidasefarvning). Antistofferne kan også mærkes med fluorokrom (fx: FITC , Rhodamine , Texas Red eller Alexa Fluor): se immunfluorescens .
Immunhistokemi anvendes i vid udstrækning til diagnose og / eller overvågning af kræft ved påvisning af unormale celler, såsom dem, der findes i kræft tumorer.
Specifikke markører er således kendt i dag for forskellige kræftformer:
Disse molekylære markører er karakteristiske for visse cellulære begivenheder såsom celleproliferation eller død (apoptose).
IHC bruges også i vid udstrækning i grundlæggende forskning til at forstå distributionen og lokaliseringen af biomarkører og proteiner, der udtrykkes differentielt i forskellige dele af biologisk væv.
Stoffet placeres på en solid støtte. Antistoffet sættes til vævspræparatet og binder specifikt det protein, der skal detekteres på det væv. Tilsætningen af et primært antistof bundet til et påvisningssystem (enzym bundet til antistoffet, hvis tilstedeværelse af hvilket af substratet forårsager en farvet (peroxidase) eller fluorescerende (Rhodamin) reaktion), der forårsager et signal synligt for det blotte øje eller ved mikroskopi og spektrofotometriske teknikker ja
Der er hovedsageligt to metoder til immunhistokemi og påvisning af antigener i biologisk væv:
Den "direkte metode" er en et-trins farvningsmetode . Det bruger et mærket antistof (dvs. antiserum konjugeret med FITC ), som reagerer direkte med de antigener, der findes i vævsafsnittene. Da der kun anvendes et antistof, er proceduren kort og hurtig. Det mangler imidlertid følsomhed på grund af lav signalforstærkning og er sjældent blevet brugt siden introduktionen af den indirekte metode.
Den "indirekte metode" anvender et umærket primært antistof (første lag), der reagerer med antigener i vævet, et mærket sekundært antistof (andet lag), som reagerer med det primære antistof. Det sekundære antistof bør være rettet mod immunoglobulin G i det primære antistof. Denne metode udviser bedre følsomhed takket være amplifikationen af signalet muliggjort af adskillige reaktioner af det sekundære antistof på forskellige antigene steder i hovedantistoffet. Det andet antistoflag kan mærkes med et fluorescerende farvestof, såsom FITC, Rhodamine eller Texas Red , som kaldes den indirekte immunfluorescensmetode . Det andet antistoflag kan også mærkes med et enzym, såsom peroxidase , alkalisk phosphatase eller glucoseoxidase . Denne sidstnævnte variant kaldes den indirekte immunoenzymmetode . Tilvejebringelse af et substrat for disse enzymer gør det muligt at etablere tilstedeværelsen af enzymet (og derfor af antistoffet) på en kvantificerbar måde.
PEA3-antistoffet bruges til at søge efter ETV4-proteinet, der udtrykkes i stort antal i Ewings runde cellesarkom.
Ewings runde cellesarkom er en meget aggressiv kræft, der primært angriber knogler og blødt væv hos ret unge mennesker. Det er knyttet til en translokation * på niveauet af CIC - DUX4-generne, som vil producere overekspression af ETV4-proteinet.
PEA3 er et monoklonalt museantistof *. Det vil sige, at musen blev injiceret med det ønskede humane antigen (ETV4) i Ewings runde cellesarkom for at skabe et immunrespons i musen og for 'det kan producere de antistoffer, der vil blive brugt til immunhistokemi.
Læsning af det tekniske arkFor at udføre en antigen / antistof-reaktion skal det voksede væv på objektglasset rehydratiseres. Så gør de omvendte trin, hvor vi lægger vævet i paraffin.