Den Klenow-fragmentet er den største af de 2 proteinfragmenter dannet ved hydrolysen af Escherichia coli -DNA-polymerase I af en protease (subtilisin).
Opdaget i 1970 bevarer den to af de katalytiske aktiviteter af DNA-polymerase I: 5 '→ 3' polymerase og 3 '→ 5' exonuklease , men har mistet sin 5 '→ 3' exonukleaseaktivitet, der er ansvarlig for nedbrydningen af nysyntes DNA. Dette er grunden til, at det ofte foretrækkes frem for hele enzymet.
Det andet fragment dannet under spaltningen af E. coli DNA-polymerase I bevarer 5 '→ 3' exonukleaseaktiviteten, men har mistet de to aktiviteter, der er tilbageholdt af Klenow-fragmentet.
Reaktionen er den samme som for DNA-polymerase I: mediumbetingelserne og reaktionshastigheden er identiske.
Klenow-fragmentet bruges til:
På grund af 5 '→ 3' exonukleaseaktiviteten af E. coli polymerase I, der gjorde mange manipulationer umulige, har Klenow-fragmentet vist sig at være meget nyttigt i forskning.
Dette fragment anvendes under DNA-replikation til at syntetisere den komplementære streng fra enkeltstrenget DNA og en primer. Element ved oprindelsen af PCR (polymerasekædereaktionsproces, på fransk polymerasekædereaktion ), erstattes det nu af termostabile enzymer såsom Taq-polymerase .
http://www.chups.jussieu.fr/polys/biochimie/BGbioch/POLY.Chp.2.6.html