Indlejret polymerasekædereaktion

Den indlejrede polymerasekædereaktion  ( indlejret PCR), også kaldet indlejret PCR , er en modifikation af den klassiske PCR for at reducere mængden af ​​uspecifikke produkter, der skyldes binding af primerne til uventede steder.

Selve polymerasekædereaktionen er en proces, der amplificerer DNA- sekvenser ved anvendelse af en termoreguleret DNA-polymerase . Produktet kan bruges til sekventering eller analyse, og denne proces er nøglestenen i mange forsknings- og laboratorieanvendelser af genetik, såsom retsmedicinsk videnskab eller DNA-fingeraftryk. Konventionel PCR kræver primere komplementære til enderne af DNA-målet. Binding af primere til forkerte steder er et tilbagevendende problem, der resulterer i amplifikation af uventede sekvenser.

Således gør den indlejrede PCR det muligt ved inddragelse af to par primere, der anvendes successivt til at begrænse dette fænomen, idet det andet par af primere formodes at amplificere en sekvens lokaliseret inden i produktet af den første PCR.

Trin

1. DNA-målet gennemgår den første PCR med et første par primere (i grønt i diagrammet). Blandt de forskellige opnåede PCR-produkter indeholder kun en den forventede sekvens.
2. Produktet fra den første reaktion gennemgår en anden PCR med et andet par primere, her i rødt. Det er meget usandsynligt, at det indledningsvis uønskede produkt vil indeholde bindingsstederne for dette andet par primere, hvilket sikrer, at produktet fra den anden PCR er meget lidt forurenet med uønsket produkt af primerdimerer, strukturer i hårnål eller alternativ målsekvens.

eksterne links

• Præsentation på ENS de Lyon-siden.
• Medicinsk publikation ved hjælp af princippet om PCR.